بهینه‌سازی کدونی و مقایسهی بیان فاکتور رشد عصبی بتا انسانی (β-NGF) بصورت نوترکیب در میزبانهای باکتریایی( BL21(DE3 و BL21(DE3)pLysS
نویسندگان
چکیده مقاله:
فاکتور رشد عصبی بتا (β-NGF) برای اولین بار بدلیل نقش حیاتی‌اش در رشد و بقای سلولهای عصبی مورد مطالعه قرار گرفت. این پروتئین که به خانواده‌ی نوروتروفین‌ها تعلق دارد در درمان بیماری‌های تخریب عصبی نظیر آلزایمر دارای نقش قابل ملاحظهای میباشد. بدین منظور، β-NGF انسانی نوترکیب برای اولینبار در ایران در دو سویهی متفاوت باکتری E.coli بیان شد. از آنجاییکه β-NGF در ساختار فعال و عملکردی خود دارای سه پیوند دیسولفیدی است، محیط احیا کننده‌ی سیتوپلاسم E.coli برای بیان آن مناسب نمی‌باشد. بنابراین، محیط اکسید کننده‌ی پریپلاسم جهت تولید β-NGF همراه با تاخوردگی صحیح مورد توجه قرار گرفت. در این تحقیق، cDNA β-NGFانسانی بدست آمده از بانک اطلاعاتی NCBI پس از بهینه‌سازی کدونی و ساب کلونینگ در وکتور pET39b(+)، حاوی ژن دی سولفید ایزومراز A، به روش ترنسفورماسیون (شوک حرارتی) به سویه‌های BL21(DE3)pLysS و BL21(DE3) انتقال یافت. بیان همزمان با استفاده از القای پروموتر با غلظت 1 میلی مولار IPTG صورت گرفت. سپس، محتوای پروتئینی استخراج شده از دو سویهی مذکور با استفاده از تکنیک‌های SDS-PAGE و دات بلات با یکدیگر مقایسه گردید. نتایج نشان دهنده بیان، بویژه در سویه باکتریایی BL21(DE3) می باشد.
منابع مشابه
بهینه‌سازی کدونی و مقایسهی بیان فاکتور رشد عصبی بتا انسانی (β-ngf) بصورت نوترکیب در میزبانهای باکتریایی( bl۲۱(de۳ و bl۲۱(de۳)plyss
فاکتور رشد عصبی بتا (β-ngf) برای اولین بار بدلیل نقش حیاتی اش در رشد و بقای سلولهای عصبی مورد مطالعه قرار گرفت. این پروتئین که به خانواده ی نوروتروفین ها تعلق دارد در درمان بیماری های تخریب عصبی نظیر آلزایمر دارای نقش قابل ملاحظهای میباشد. بدین منظور، β-ngf انسانی نوترکیب برای اولینبار در ایران در دو سویهی متفاوت باکتری e.coli بیان شد. از آنجاییکه β-ngf در ساختار فعال و عملکردی خود دارای س...
متن کاملکلون سازی و بیان ترشحی فاکتور رشد بتا-NGF انسانی با استفاده از پپتید نشانه ی اصلاح شده ی آنزیم آلفا آمیلاز باسیلوس لیکنی فورمیس بومی ایران
فاکتور رشد عصبی(NGF) عضوی شناخته شده از خانواده ی پروتئین های نوروتروفین است که در درمان بیماری هایی مانند مولتی پل اسکلروزیس و آلزایمر بکار گرفته می شود. تولید پروتئین نوترکیب در E. coli دارای معایب خاصی است که شکل گیری اینکلوژن بادی و عدم شکل گیری پیوندهای دی سولفیدی درسیتوپلاسم در درجه اول قرار دارند .بنابراین ما به منظور هدایت β-NGF نوترکیب تولید شده به سمت پری پلاسم، استفاده از پپتید نشانه...
متن کاملبیان نوترکیب فاکتور رشد اپیدرم انسانی در باکتری E. coli و ارزیابی اثر آن بر دودمان سلولی NIH-3T3
خانواده EGF شامل 13 عضو می باشد و فاکتور رشد اپیدرم انسانی یکی از اعضای این خانواده شناخته شده که در ترمیم زخم های اپیدرم پوستی ایفای نقش می کند. این فاکتور، یک پلی پپتید اساسی برای ترمیم زخم و آغاز تقسیم میتوزی است. در این مطالعه، ژن فاکتور رشد اپیدرم انسانی از بانک ژنی استخراج و پس از بهینه سازی کدون‌های آن براساس ترجیح کدونی باکتریE. coli در وکتور pET21a(+) سنتز گردید. وکتور حامل ژن مذکور به...
متن کاملجداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO
جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO راحله حلبیان1، ناصر شاگردی اسماعیلی2، آرزو اوودی2، ناصر مسروری3، دکتر ناصر امیری‌زاده4، دکتر کامران موسوی حسینی5، دکتر احمد قره‌باغیان6، دکتر حوری رضوان7، دکتر محمد علی جلیلی8، دکتر مهریار حبیبی رودکنار9 چکیده سابقه و هدف فاکتور VII ، یک گلیکوپروتئین پلاسمایی است که در آبشار انعقادی تشکیل فیبرین، شرکت دارد....
متن کاملتولید آزمایشگاهی فاکتور رشد اپیدرم انسانی نوترکیب و ارزیابی عملکرد آن در بقای سلولی
Background and purpose: Human epidermal growth factor (hEGF) is a polypeptide of 53 amino acids with various medical application such as wound healing. The purpose of this study was cloning, expression, and purification of recombinant human EGF (rhEGF) and assessment of its mitogenic effect on NIH 3T3 cells. Materials and methods: Subcloninig of hEGF was performed in to pET24a (+). Protein e...
متن کاملبیان فاکتور رونویسی دوپامینرژیکی Nurr1 در سلولهای انسانی بهوسیله لنتی ویروسهای نوترکیب
هدف: هدف این تحقیق تولید لنتی ویروسهای حامل ژن Nurr1 و بیان در سلولهای انسانی میباشد. مواد و روشها: قطعه ژنی IRES-EGFP با آنزیمهای Bgl ll/Not1 از ناقل pIRES2-EGFP جدا و با Klenow کور (Blunt) گردید. ناقل لنتی ویروسی pNL-EGFP/CMV/WPREdU3 با آنزیمهای Nhe1/ Xho1 برش و دو سر آن کور شد. قطعه ژنی ایزوله شده به این ناقل منتقل شد تا سازه لنتی ویروسی (I) بهوج...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
عنوان ژورنال
دوره 29 شماره 2
صفحات 101- 116
تاریخ انتشار 2017-02-19
با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023